如題，采用微生物法測(cè)定有兩個(gè)前提條件。一是使用的菌株需要對(duì)待測(cè)維生素足夠敏感，并能快速生長(zhǎng)，其生長(zhǎng)繁殖速度與待測(cè)維生素濃度存在一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系；二是該維生素為水溶性。國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)中提到多種維生素測(cè)定的方法為微生物法。現(xiàn)總結(jié)如下：

1、葉酸，微生物法檢測(cè)，鼠李糖乳桿菌ATCC7469

2、維生素B12，嬰幼兒食品和乳品檢測(cè)，微生物法，萊士曼乳桿菌ATCC 7830

3、維生素B6，微生物法檢測(cè)，用卡爾斯伯酵母菌ATCC 9080

4、泛酸，嬰幼兒食品和乳品檢測(cè)，微生物法，植物乳桿菌ATCC 8014

5、煙酸，微生物法檢測(cè)，植物乳桿菌ATCC 8014

6、生物素，微生物法檢測(cè)，植物乳桿菌ATCC 8014

7、肌醇，微生物法檢測(cè)，葡萄汁酵母菌ATCC9080

維生素B2在原來(lái)的國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB5009.85-2003中也推薦微生物法，但該標(biāo)準(zhǔn)2017年廢止，現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)不包含微生物法。

圖.HiMedia生產(chǎn)的維生素B12測(cè)定用培養(yǎng)基

水溶性維生素的提取方法包括用緩沖液或硫酸溶液進(jìn)行水解、調(diào)節(jié)pH值沉淀蛋白或者使用合適的蛋白沉淀劑、用合適的酶進(jìn)行酶解等。

對(duì)于煙酸，數(shù)據(jù)表明大多數(shù)食品用水直接提取即可，但是谷類必須用酸或堿才能提取*。

對(duì)于泛酸，由于它對(duì)酸、堿的不穩(wěn)定性，樣品提取都用水溶解，在中性條件下直接提取或高壓處理。有人發(fā)現(xiàn)用淀粉酶處理酵母和動(dòng)物組織后，得到的泛酸含量會(huì)增加。

對(duì)于生物素，有研究表明3mol/LH2SO4水解處理時(shí)，植物組織中的生物素不穩(wěn)定，受到一定的破壞；而動(dòng)物組織中結(jié)合態(tài)的生物素能更多地游離出來(lái)，所以推薦用1mol/L H2SO4于121℃水解植物性來(lái)源的樣品2h、3mol/L于H2SO4121℃水解動(dòng)物性來(lái)源的樣品2h。

對(duì)于維生素B6，有人發(fā)現(xiàn)植物性樣品用0.022mol/L鹽酸水解5h能得到zui大值，而米糠需要用1mol/L的鹽酸才能水解充分。

對(duì)于葉酸的測(cè)定，研究表明，蛋白酶、淀粉酶和葉酸軛合酶聯(lián)合提取，能使12種食品的葉酸水平平均提高19%。但對(duì)于不同食品應(yīng)區(qū)分對(duì)待。如它對(duì)谷類產(chǎn)品有效，但對(duì)蔬菜則不然。蛋白酶能使菠菜釋放的葉酸，而淀粉酶無(wú)效。總之，適宜的前處理方法有助于獲得zui大檢出結(jié)果。